Skip to content

Warianty genetyczne w C5 i słaba odpowiedź na Eculizumab AD 4

1 miesiąc ago

444 words

Zarówno rC5, jak i rC5m ulegały ekspresji w komórkach 293 przy użyciu przejściowego układu ekspresyjnego Expi293 (Invitrogen) i oczyszczono je z pożywki hodowlanej do hodowli tkankowej zgodnie z modyfikacją wcześniej opisanej metody.20 Rekombinant C5 oznaczono ilościowo za pomocą oznaczenie bicinchoniniczne (Pierce Biotechnology), ocenione za pomocą elektroforezy na żelu siarczanowym z dodecylosiarczanem-poliakryloamidem i elektroforezę kapilarną laboratoryjną na chipie (zestaw Protein 230, Agilent) i przechowywać w temperaturze -80 ° C. Końcowe preparaty rC5 i rC5m miały czystość ponad 95%. Test powinowactwa wiązania
Do oceny wiązania ekulizumabu z C5 wykorzystano analizę powierzchniowo-plazmowo-rezonansowej (Biacore 3000) z zastosowaniem metody wychwytu antyludzkiej IgG (Fc). Antyludzką IgG (Fc) (KPL 01-10-20) rozcieńczoną do 0,1 mg na mililitr w 10-mM octanie sodowym (pH 5,0) unieruchomiono na dwóch komórkach przepływowych układu czujnika CM5 przez 8 minut za pomocą sprzęgania aminowego. Ekulizumab rozcieńczono do 0,25 .g na mililitr w buforze roboczym (10 mM bufor HEPES, 150 mM chlorek sodu, 3 mM EDTA i 0,005% polisorbat 20, pH 7,4). Jako referencję zastosowano jedną komórkę przepływową. Rozcieńczone przeciwciało następnie wstrzyknięto na drugą komórkę przepływową, a następnie wstrzyknięto rC5 lub rC5m w stężeniach w zakresie od 4 nM do uM. Powierzchnię regenerowano za każdym razem za pomocą 20 mM kwasu chlorowodorowego i 0,01% polisorbatu 20 (100 .l na minutę, wstrzyknięcie 200 .l).
Wyniki
Pacjenci o słabej odpowiedzi w badaniu AEGIS
Rycina 1. Rycina 1. Analiza farmakodynamiczna liculizumabu u 2 pacjentów ze słabą odpowiedzią i u 27 pacjentów z dobrą odpowiedzią w badaniu AEGIS. Panel A pokazuje poziomy dehydrogenazy mleczanowej (LDH), które pozostały podwyższone podczas 12-tygodniowego okresu leczenia u 2 pacjentów ze słabą odpowiedzią na ekulizumab, podczas gdy u 27 pacjentów z dobrą odpowiedzią powrócili do wartości prawie prawidłowych. Panel B pokazuje aktywność hemolityczną in vitro w próbkach surowicy pobranych od pacjentów. U 2 pacjentów ze słabą odpowiedzią leczenie ekulizumabem nie miało wpływu na poziom hemolizy, podobnie jak poziom LDH, podczas gdy u pacjentów z dobrą odpowiedzią aktywność hemolityczna była całkowicie tłumiona przez cały okres leczenia.
Podczas 12-tygodniowego okresu leczenia ekulizumabem w badaniu AEGIS dwoje pacjentów z PNH miało znacznie podwyższone poziomy LDH, które nie uległy zmniejszeniu, co sugeruje, że ekulizumab nie chronił erytrocytów tych dwóch pacjentów przed niekontrolowaną aktywacją dopełniacza (Figura 1A i Tabela Zostało to potwierdzone w późniejszej analizie farmakokinetyki i farmakodynamiki. Tak więc pomimo faktu, że poziomy ekulizumabu w szczytowym i minimalnym stężeniu w czasie badania utrzymywały się znacznie powyżej minimalnego poziomu wymaganego do całkowitego zahamowania hemolizy za pośrednictwem dopełniacza u pacjentów z PNH (> 35 .g na mililitr) (ryc.
[podobne: leczenie endometriozy forum, usg żył kończyn dolnych, Warszawa ginekolog ]

Powiązane tematy z artykułem: leczenie endometriozy forum usg żył kończyn dolnych Warszawa ginekolog