Skip to content

Warianty genetyczne w C5 i słaba odpowiedź na Eculizumab AD 6

1 miesiąc ago

471 words

Panel B pokazuje typową 2% analizę żelu agarozowego w celu wykrycia obecności mutacji c.2654G . A. Mutacja ta tworzy miejsce rozpoznawania ApaLI, które po strawieniu ApaLI generuje produkt reakcji łańcuchowej polimerazy o długości 185 pz (PCR) i dwa dodatkowe fragmenty DNA o długości 103 pz i długości 82 pz u osób heterozygotycznych (ścieżki 1, 2 i 3). Ścieżka 4 pokazuje produkt PCR z homozygotycznej próbki bez mutacji. Produkt PCR pochodzący z plazmidu wstawionego z sekwencją zmutowaną zastosowano jako kontrolę pozytywną. Zamplifikowaliśmy wszystkie 41 egzonów genu C5 za pomocą zestawów primerów specjalnie zaprojektowanych dla każdego eksonu, stosując jako matrycę genomowy DNA otrzymany z komórek jednojądrzastych otrzymanych od pacjentów, którzy mieli słabą odpowiedź, i bezpośrednio zsekwencjonowaliśmy wszystkie produkty PCR z każdego eksonu (ryc. S1 w dodatku uzupełniającym). Zidentyfikowaliśmy pojedynczą missense C5 heterozygotyczną mutację na eksonie 21, c.2654G . A (numer dostępu do Data Bank of Japan, AB860298), który przewiduje polimorfizm p.Arg885His, u obu pacjentów, którzy mieli słabą odpowiedź. Tej mutacji nie zaobserwowano u 7 pacjentów, którzy mieli dobrą odpowiedź na ekulizumab (Figura 3A). Ponadto, potwierdziliśmy, że 9 innych japońskich pacjentów, którzy otrzymali leczenie po ukończeniu badania AEGIS i którzy mieli słabą odpowiedź na ekulizumab, miało tę samą mutację genu C5 (Tabela S1 w dodatkowym dodatku). 11 pacjentów ze słabą odpowiedzią, którzy mieli tę mutację, zostało zidentyfikowanych wśród 345 japońskich pacjentów, którzy otrzymali ekulizumab (wskaźnik słabej odpowiedzi, 3,2%).
Mutacja c.2654G . A generuje nowe miejsce rozpoznawania ApaLI (ryc. S3 w dodatkowym dodatku); w związku z tym, po trawieniu ApaLI, produkt PCR o długości 185 par zasad związany z eksonem 21, związany z niezmutowanym C5, wytwarza dwa fragmenty DNA o długości 103 bp i długości 82 bp (Figura 3B). Jednakże produkty trawienia ApaLI od wszystkich 11 pacjentów, którzy mieli słabą odpowiedź zawierały mieszaninę fragmentów 185-, 103- i 82-bp; potwierdza to, że każdy z tych pacjentów był heterozygotyczny, z c.2654G . A w jednym allelu i nie zmutowaną sekwencją w innym allelu.
Następnie przeanalizowaliśmy częstość występowania tej mutacji w zdrowej populacji japońskiej, stosując test na bazie żelu w połączeniu z próbkami DNA. Stwierdziliśmy, że 10 z 288 zdrowych osób w Japonii miało tę samą heterozygotyczną mutację (3,5%), co jest zgodne z częstością występowania obserwowaną w populacji japońskich pacjentów z PNH.
Aby określić rozkład tego polimorfizmu w innych populacjach rasowych i etnicznych, przebadaliśmy kilka paneli DNA. Polimorfizm c.2654G . A zidentyfikowano u spośród 120 Chińczyków Han, ale nie był widoczny w próbkach pobranych od 100 osób pochodzenia brytyjskiego i od 90 osób pochodzenia meksykańskiego.
Mutant C5 u japońskich pacjentów ze słabą odpowiedzią
Rysunek 4
[hasła pokrewne: ginekolog Warszawa, USG genetyczne, dieta w ciąży ]

Powiązane tematy z artykułem: dieta w ciąży ginekolog Warszawa USG genetyczne